Indhold
De kemiske forbindelser cetyltrimethylammoniumbromid, hexadecyltrimethylammoniumbromid, palmityltrimethylammoniumbromid og cetrimoniumbromid er alle også kendt af CTAB. Kemikaliet anvendes som en pH-vedligeholder i DNA-sekventielt genom, især planterne.
Formel CTAB
Mængderne af formlerne fra de forskellige CTAB-kemikalier varierer afhængigt af laboratoriet. Imidlertid indbefatter alle ingredienser 1 M Tris HCI pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl og H20 (undertiden to gange destilleret). For CTAB-komponenten bruger nogle laboratorier cetyltrimethylammoniumbromid og andre hexadecyltrimethylammoniumbromider.
Fremstilling af vegetabilske væv
Fremstillingen af plantevævet kan variere afhængigt af materialet. Vægge og cellemembraner skal brydes for at få adgang til nukleart materiale uden nogen nedbrydning. Ved fræsning tillader plantemateriale med flydende nitrogen normalt adgang til DNA, der holder skadelige cellulære enzymer og inaktive kemikalier.
Suspension og centrifugering
Det knuste væv placeres på CTAB bladet og indsættes i en skål med rindende vand. Den blandes derefter med chloroform og centrifugeres for at separere de opløselige proteiner og andre materialer. Derefter udfældes DNA'et fra den vandige fase og vasket omhyggeligt for at fjerne de forurenende salte. Det oprensede DNA trækkes derefter tilbage og opbevares på et TE-glidemiddel eller sterilt destilleret vand.