Indhold
Tuberkulose er en infektiøs sygdom forårsaget af bakterien Mycobacterium tuberculosis og er en luftvejssygdom, der er karakteriseret ved knoldannelser, nekrose, abscesser, fibrose og forkalkning i lungerne. Det kan også inficere nyrer, lymfeknuder, knogler, led og hud.
Den primære laboratoriediagnose af denne bacillus involverer farvning af den for at visualisere bakterierne under mikroskopet. Den valgte prøve er sputum eller bronchoalveolær skylning for at identificere luftvejsinfektion eller en prøve af faktisk væv.
Fysiologi
Mycobacterium tuberculosis er en stavformet organisme (baciller), ikke-mobil, ikke-obligatorisk spore. Denne bakterie måler 0,4 x 3 mikrometer i længden og gennemgår binær fission (opdeling af reproduktiv celle) hver 15. til 24 timer, hvilket betragtes som langsomt sammenlignet med andre bakterier. På grund af dette kan det tage op til ni uger før mycobacterium vises i dyrkningsmediet.
Denne organisme er følsom over for UV-lys og varme (såsom pasteurisering), men modstår kemiske desinfektionsmidler.
Gram plet
Mycobacterium tuberculosis kan ikke virkelig klassificeres som gram-positiv eller gram-negativ. Denne klassifikation foretages baseret på mængden af peptidoglycan i cellevæggen af en bakterie. En gram-positiv art har et tykt lag af dette molekyle (ca. 90%), mens en gram-negativ art har et tyndt lag (fra 5% til 20%). Grampletter trænger ind i cellevæggen og binder til de kemiske komponenter i den. Under mikroskopet bliver de farvede bakterier lilla eller lyserøde.
Med mycobacterium tuberculosis er cellevæggen sammensat af peptidoglycan, men også komplekse lipider, der hæmmer gramfarveindtrængning. Cellevæggen modstår også misfarvning med syre eller alkohol, hvorfor mycobacterium kaldes "syreresistent". Cellevægslipider er mycolsyre, strengfaktor og D-voks. Hvis bakterierne skulle farves, ville cellerne fremstå grampositive eller svagt bleg med meget lidt farve.
For at se bakterierne skal der bruges specielle pletter, såsom Aumarine eller Zhiel-Neelson-plet.
Aumarine-rhodamin plet
Processen under anvendelse af auramin-rhodamin bruger et gult fluorescerende farvestof til at visualisere mycobacterium tuberculosis under et fluorescensmikroskop. Kaliumpermanganat eller acridinorange kan bruges som kontrastfarvestof. Under linsen vises bakteriecellerne grønne.
Auramin-rhodaminfarvestoffet er mere følsomt end Zhiel-Neelson og mere økonomisk levedygtigt.
Ziehl-Neelson farve
Ziehl-Neelson-pletten blev skabt af forskerne Franz Ziehl og Friedrich Neelsen og bruger opvarmet carbol-fuchsin, en høj koncentration af syre-alkohol og et kontrastfarvestof, såsom grøn malakit eller methylenblåt. Under et fluorescensmikroskop vises bakteriecellerne lyserøde.
Ziehl-Neelson-farvestoffet er standard for ekspertise til den foreløbige identifikation af mycobacterium tuberculosis og mycobacterium leprae.
Agar
Sekundært til identifikation af mikroskopi skal mycobacterium tuberculosis dyrkes på en særlig agarkultur. Lowenstein-Jensen gelatine har komplekse organiske stoffer (såsom æg og kartofler), salte, glycerol og malakitgrøn (som hæmmer andre bakterier). Antibiotika kan tilsættes for yderligere at hæmme forurenende mikroorganismer. Prøven placeres på denne agar, og bakterierne vokser om tre til ni uger.
En næringsstofkulturopløsning, såsom albumin og biotin, kan bruges til at understøtte væksten af selv den mindste mængde målbakterier. Dette er kendt som Middlebrook 7H9 (eller 7H12).
I begge medier vil kolonierne fremstå som små, polerede, lysebrune kolonier.
Med avanceret teknologi kan mycobacterium tuberculosis nu dyrkes ved hjælp af en automatiseret læser. En flydende opløsning af Middlebrook 7H9-medium og en fluorescerende indikatorforbindelse bruges til at overvåge vækst og rapportere positiv eller negativ infektion.